最近浏览
产品名称：干酪乳杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
英文名称：PCR Detection Kit for Lactobacillus casei (Fluorescent Probe Assays)
产品编号与包装规格：
| 编号 | 规格 |
|---|---|
| FZ037BF2 | 48 测试/盒 |
产品简介：本试剂盒仅适用于食品中纯培养的干酪乳杆菌的定性检测，其他试验需另按照国标《GB 4789.35-2023食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验》开展。
检测原理：基于Real Time PCR技术，参考GB 4789.35-2023标准，利用针对于干酪乳杆菌dnaJ基因的引物、荧光探针以及其他反应所需试剂，加入待检样品即可进行扩增反应。在发生扩增过程中，荧光探针与目的基因片段结合，可被Taq酶分解并产生荧光信号，此时荧光定量PCR仪可识别该荧光信号，同时根据其强弱变化绘制出相应的实时扩增曲线，进而判定干酪乳杆菌是否检出。
产品组分：
储存条件与保质期：-20℃避光储存，有效期为12个月，避免反复冻融。
灵敏度：最低检验限达到10~100 copies/µL DNA。
所需其他材料和适用仪器：荧光定量PCR仪（具有能够检测FAM标记的荧光通道）、高速离心机、移液器、移液枪头及离心管等。
干酪乳杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用指南：
1）可疑菌落模板DNA的制备
挑取MC或者MRS琼脂平板上的可疑菌落，充分悬浮200 µL生理盐水中，12000 r/min离心3 min，弃上清，往沉淀加入30 μL裂解液或者标准中的DNA提取液，充分悬浮管底沉淀，轻弹管壁消除气泡，金属浴或者水浴100℃加热10 min，迅速冷却。
12000 r/min离心5 min，上清即为待测样品DNA，静置冰上，长时间不用应再次离心。-20℃保存。
注：菌量过高会降低 DNA 粗提效率，建议待处理菌液菌量控制在 10⁵ cfu 以下为宜；100℃加热前，可将样品置于液氮与热水中反复冻融 5~6 次，以提升 DNA 提取效果。实验室也可根据实际情况，选用商品化 DNA 提取试剂盒进行提取。
2）加样、反应
按照需求取n个PCR反应管（n=1管阴性对照+待检测样品数+1管阳性对照），从试剂盒中取出预混液，充分融化，涡旋后短暂离心，以上每管加入20 μL预混液，待用。
向上述n个反应管中分别加入阴性对照、待测样品DNA、阳性对照各5 μL，总反应体积为25 μL。盖紧管盖，短暂离心，立即进行PCR扩增反应。
PCR反应体系为25 μL，取FAM检测通道，在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，具体程序如下：
注：在反应阶段2中60℃时收集荧光信号，对于多通道荧光PCR仪，取 “FAM”为信号采集通道，淬灭基团选择“None”，染料校正选择“None”。
3）检验结果方法：
一般情况下，可通过软件自动设定的基线、阈值等直接读取检测结果。如需调整，可根据所使用仪器的自身情况（如噪声等）以及选取的不同荧光通道进行调整。
质量控制：阴性对照未出现明显的S型扩增曲线或Ct值＞40，阳性对照出现S型扩增曲线且其Ct值＜30。若阴阳性对照不同时满足上述条件，则本次检测结果无效，应重新检测或与产品技术支持联系。
结果判读（根据反应所得Ct值判读，具体见下表）：
干酪乳杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)使用注意事项
实验环境条件和过程控制应参照GB/T 27403《实验室质量控制规范食品分子生物学检测》规定执行。
使用本试剂盒前请仔细阅读本说明书全文，检测过程中建议穿洁净工作服，戴一次性手套，使用的移液枪头需提前灭菌。
试剂盒中试剂使用前需充分融化、混匀，短暂离心后使用，期间需尽量避免产生气泡，加样完毕后检查反应管是否盖紧，避免泄露造成污染。
待检测样品基因变异可能会造成假阴性结果；待检测样品交叉污染、实验室环境污染以及试剂污染均会造成假阳性结果。
不同批号的产品请勿混合使用，请在产品有效期内使用试剂盒，由于操作不当引起的误判，以及由此误判引发的其他事项，本公司概不负责。
检测完毕后，根据相关规定正确处理废弃耗材以及扩增产物。
本仅限科研目的使用，本试剂盒检测结果可作为食品中相关菌种定性检测的科研参考依据。
